A PCR Digital é considerada a terceira geração das PCRs e difere da qPCR, principalmente, por ser um verdadeiro contador de moléculas. A quantificação é absoluta, não necessitando de uma curva padrão e o grande diferencial é a SENSIBILIDADE que essa técnica permite, uma vez que consegue quantificar quantidades mínimas do seu alvo. Essa sensibilidade se dá pelo particionamento da amostra em gotas (Droplets) permitindo quantificar quantas cópias do seu gene alvo estão dentro da amostra. O equipamento vai identificar gotas positivas e negativas e em cada gota positiva, você terá pelo menos uma cópia do seu gene alvo.
Portanto, é uma técnica muito indicada quando temos um gene alvo em baixa concentração e precisamos detectá-lo de forma precisa.
O Workflow da técnica de ddpCR é simples, sendo um processo relativamente rápido e extremamente preciso. O software de análise é intuitivo e o valor de uma reação de ddPCR não difere muito de uma da PCR quantitativo convencional, mas você ganhará muito na sensibilidade e confiabilidade dos resultados.
A plataforma do PCR Digital em Gotas é composto por 4 etapas, basicamente:
Inicialmente você faz o particionamento da amostra em gotas através de uma geradora de gotas(Código 1864002), por microfluídica, onde você colocará sua amostra de DNA ou cDNA e óleo especial
Após essa etapa será feita a transferência das gotas para uma placa de PCR, selagem térmica dessa placa (através de uma seladora de placas que faz parte do Workflow, código 1814000) – processo extremamente rápido – e em seguida a placa é transferida para um termociclador convencional de poço profundo(como nosso modelo T100, Código 1861096), onde ocorrerá as reações de PCR em cada uma das gotas geradas. Para cada amostra você terá até 20000 gotas geradas e em cada uma, uma reação de PCR ocorrerá!
Por último, a análise/leitura das gotas através de uma leitora (QX200 reader, código 1864003) que irá ler as fluorescencias (EVA/FAM; VIC/HEX) e será atribuído o número zero para as gotas negativas e o número 1, para as gotas positivas, É uma contagem binária e por isso, o nome PCR Digital. As quantificações exatas serão feitas através da correção de Poisson e um software extremamente intuitivo irá finalizar todas as análises. A divisão da amostra em várias partições dá a chance àqueles genes em baixa concentração serem detectados e quantificados.
A gama de aplicações é imensa e vem aumentando a cada dia, entre elas, destacamos: Biópsia líquida, anáise de microRNas, CNV, análises ambientais, CRISPR, quantificação de bibliotecas para NGS e controle de qualidade em diferentes Indústrias Farmacêuticas.

Especificações:

Tamanho da amostra inicial: 20uL
Capacidade do gerador de gotas QX200: 1–8 amostras/cartucho(Consultar AutoDG para automação e aumento de amostras)
Gotas por amostra de 20 µl: Até 20.000
Capacidade do leitor de gotas QX200: 1–96 amostras
Iluminação de amostra: Diodos emissores de luz
Detecção de amostra: Contador de fótons de vários pixels
Canais de detecção: FAM (EvaGreen), HEX (VIC)
Faixa dinâmica linear: 5 ordens de grandeza
Precisão: ± 10%
Gotas por placa de 96 poços: ~1,5 milhões
Dimensões do gerador de gotas QX200 (L x P x A): 28 x 36 x 13 cm (11 x 14 x 5″)
Dimensões do leitor de gotas QX200 (L x P x A): 66 x 52 x 29 cm (26 x 20 x 11″)